تاثیر استفاده از عسل طبیعی به عنوان ماده ی سرمامحافظ جدید بر نرخ زنده مانی، خروج از زونا و لانه گزینی در بلاستوسیست های منجمد-ذوب شده ی موش

نوع مقاله: مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست‌فناوری (NIGEB)، تهران، ایران

2 پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری (NIGEB)، تهران، ایران

چکیده

بهینه­سازی فرایند انجماد شیشه­ای، به عنوان راهکاری جهت ذخیره­ی رویان­های حاصل از تکنیک­های کمک­باروری، مستلزم تقابل با عوامل مخربی از قبیل تشکیل کریستال­های یخ، سمیت سلولی و شوک اسمزی است که رویان را در معرض شرایط نا­مساعد قرار می­دهند. حضور کربوهیدرات­ها به عنوان مواد سرما­محافظ نفوذ­نا­پذیر، تلاشی در راستای کاهش این تنش­ها می­باشد. از آن­جایی که استفاده­ی ترکیبی از قندها نتایج بهتری را در پی داشته، در این طرح، از عسل طبیعی که متشکل از مونو­ساکارید­ها و دی­ساکارید­های مختلف است به عنوان ماده­ی سرمامحافظ جایگزین ساکارز، در انجماد بلاستوسیست موش استفاده شد. بدین منظور بلاستوسیست­های درون­تنی موش پس از استحصال، به طور تصادفی به دو گروه انجمادی عسل و ساکارز تقسیم گشتند. در بخش اول آزمایش، بلاستوسیست­ها تحت انجماد با محیط­های حاوی غلظت­های مختلف عسل قرار گرفتند و در نهایت غلظت­های بهینه تعیین شدند. بخش دوم به مقایسه­ی تاثیر محلول­های انتخاب شده و محیط­های حاوی ساکارز بر نرخ زنده­مانی، خروج از زونا و لانه­گزینی اختصاص یافت. در بخش اول، غلظت­های بهینه­ی 1 و 2 مولار به ترتیب در محیط انجماد و ذوب برگزیده شدند. نتایج حاصل از بخش دوم آزمایش نشان داد که استفاده از عسل طبیعی نه تنها در میزان زنده­مانی توانست با گروه ساکارز برابری نماید، بلکه قادر به حفظ نرخ خروج از زونا و مهم­تر از آن لانه­گزینی در سطح گروه ساکارز نیز بود. با توجه به نتایج حاصل از این تحقیق می­توان عسل طبیعی را به عنوان ماده­ی سرمامحافظ نفوذ­ناپذیر مناسبی جهت جایگزینی با ساکارز و بهینه­سازی روند انجماد معرفی کرد.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

The Effect of Using Natural Honey as New Cryoprotectant on Vitrified-warmed Blastocysts Survival, Hatching and Implantation Rate

نویسندگان [English]

  • F. Sarmadi 1
  • S. Esfandiari 1
  • M. Dashtizad 2
  • M. Shamsara 2
1 Department of Animal Biotechnology, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology (NIGEB), Tehran, Iran
2 Department of Animal Biotechnology, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology (NIGEB), Tehran, Iran
چکیده [English]

Vitrification process optimization, as a way to store embryos derived from assisted reproductive techniques, requires dealing with several destructive factors. The presence of carbohydrates as non-permeating cryoprotectants is an attempt in order to reduce these stresses. Since the combination use of sugars leads to better results, in this project, natural honey which consists of various monosaccharides and disaccharides was applied as an alternative to sucrose in mouse blastocyst vitrification. For this purpose, the first part of the experiment was conducted to determine the optimum concentration of honey in vitrification and warming solutions. The second part was designed to compare the effect of honey-based selected solutions and sucrose-based one in terms of survival, hatching and implantation rate. Among different concentrations of honey, optimum concentrations of 1 and 2 M were chosen for vitrification and thawing mediums, respectively. Results of the second part demonstrated that, not only the survival rate can be equal with sucrose when using honey, but it also brings about as good results as the sucrose-based group regarding the hatching rate and more importantly the implantation rate. Therefore, we can introduce natural honey, as an appropriate substitute for sucrose to optimization the vitrification process.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Vitrification
  • Non-permeating
  • Cryoprotectant
  • Natural honey
  • Mouse blastocyst
  1. AbdelHafez FF., Desai N., Abou-Setta AM., Falcone T., Goldfarb J., 2010. Slow freezing, vitrification and ultra-rapid freezing of human embryos: a systematic review and meta- analysis. Reproductive Biomedicine Oonline, 20(2): 209-222.
  2. Alfoteisy B.A., 2012. Natural honey as a cryoprotectant to improve viability of vitrified bovine oocytes. MSc Thesis, Department of Veterinary Biomedical Sciences, University of Saskatchewan, Saskatoon, Saskatchewan, Canada. 92 pp.
  3. Arav A., 2014. Cryopreservation of oocytes and embryos. Theriogenology, 81(1): 96-102.
  4. Bogdanov S., Jurendic T., Sieber R., Gallmann P., 2008. Honey for nutrition and health: a review. Journal of the American College of Nutrition, 27(6): 677-89.
  5. Bogdanov S., 2012. Honey as nutrient and functional food. Proteins, 1100:1400-2700.
  6. Davidson A.F., Benson J.D., Higgins A.Z., 2014. Mathematically optimized cryoprotectant equilibration procedures for cryopreservation of human oocytes. Theoretical Biology and Medical Modelling, 11: 13.
  7. El-sheshtawy R.I., El-badry D.A., Gamal A., El-nattat W.S., Almatty A.M.A., 2016. Natural honey as a cryoprotectant to improve Arab stallion post-thawing sperm parameters. Asian Pacific Journal of Reproduction, 5: 331-334.
  8. Eroglu A., Bailey SE., Toner M., Toth TL., 2009. Successful cryopreservation of mouse oocytes by using low concentrations of trehalose and dimethylsulfoxide. Biology of Reproduction, 80(1): 70-78.
  9. Eto T., Takahashi R., Kamisako T., Hioki K., Sotomaru Y., 2014. A study on cryoprotectant solution suitable for vitrification of rat two-cell stage embryos. Cryobiology, 68(1): 147-151.
  10. Kuwayama M., 2007. Highly efficient vitrification for cryopreservation of human oocytes and embryos: the Cryotop method. Theriogenology, 67:73-80.
  11. Manyi-Loh C.E., Clarke A.M., Ndip N., 2011. An overview of honey: therapeutic properties and contribution in nutrition and human health. African Journal of Microbiology Research, 5(8): 844-852.
  12. McWilliams R., Gibbons W., Leibo S., 1995. Fertilization and early embryology: Osmotic and physiological responses of mouse zygotes and human oocytes to mono-and disaccharides. Human Reproduction, 10(5): 1163-1171.
  13. Moore K., Bonilla A.Q., 2006. Cryopreservation of mammalian embryos: the state of the art. Annual Review of Biomedical Sciences, 8: 19-32.
  14. Murakami M., Egashira A., Tanaka K., Mine C., Otsubo H., Kuramoto T., 2014. Perinatal outcomes for transfer of blastocysts vitrified and warmed in defined solutions with recombinant human albumin: 374 babies born after 898 embryo transfers. Journal of Assisted Reproduction and Genetics, 31: 1605-1610.
  15. Naing S., Wahid H., Azam K.M., Rosnina Y., Zuki A., Kazhal S., Bukar M., Thein M., Kyaw T., San M., 2010. Effect of sugars on characteristics of Boer goat semen after cryopreservation. Animal Reproduction Science, 122: 23-28.
  16. Nynca J., Judycka S., Liszewska E., Dobosz S., Grudniewska J., Arai K., 2016. Utility of different sugar extenders for cryopreservation and post-thaw storage of sperm from Salmonidae species. Aquaculture, 464: 340-348.
  17. Paul A.K., Liang Y., Nagai T., Parnpai R., 2014. In Vitro Development Potentiality of Expanded Bovine Blastocysts Subsequent to Cryotop Vitrification. The Thai Journal of Veterinary Medicine, 44: 513.
  18. Pereira R., Marques C., 2008. Animal oocyte and embryo cryopreservation. Cell and Tissue Banking, 9(4): 267-277
  1. Perez RA., Iglesias MT., Pueyo E., Gonzalez M., de Lorenzo C., 2007. Amino acid composition and antioxidant capacity of Spanish honeys. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 55(2): 360-365.

 

  1. Saito N., Imai K., Tomizawa M., 1994. Effect of sugars- addition on the survival of vitrified bovine blastocysts produced in vitro. Theriogenology, 41(5): 1053-1060.
  2. Sakkas D., Urner F., Menezo Y., Leppens G., 1993. Effects of glucose and fructose on fertilization, cleavage, and viability of mouse embryos in vitro. Biology of Reproduction, 49(6):1288-1292.
  3. Sanchez R., Risopatrón J., Schulz M., Villegas J., Isachenko V., Kreinberg R., 2011. Canine sperm vitrification with sucrose: effect on sperm function. Andrologia, 43(4): 233-241.

 

  1. Somfai T., Nguyen Thi M., Noguchi J., Kaneko H., Kashiwazaki N., Kikuchi K., 2015. Optimization of cryoprotectant treatment for the vitrification of immature cumulus-enclosed porcine oocytes: comparison of sugars, combinations of permeating cryoprotectants and equilibration regimens. The Journal of Reproduction and Development, 61(6): 571-579.

 

  1. Vanderzwalmen P., Bertin G., Debauche C., Standaert V., Van Roosendaal E., Vandervorst M., Bollen N., Zech H., Mukaida T., Takahashi K., 2002. Births after vitrification at morula and blastocyst stages: effect of artificial reduction of the blastocoelic cavity before vitrification. Human Reproduction, 17: 744-751

 

  1. Yimer N., Muhammad N., Sarsaifi K., Rosnina Y., Wahid H., Khumran A., Kaka A., 2015. Effect of honey supplementation into Tris Extender on Cryopreservation of Bull Spermatozoa. Malaysian Journal of Animal Science, 18: 47-54.